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為什么稀釋內毒素標準品需要旋渦振蕩?

發布時間: 2023-10-26  點擊次數: 163次

《美國藥典》中的細菌內毒素檢查法中規定,應使用國家參考標準內毒素(RSE),復溶后應旋渦振蕩不少于20min;復溶后的原液于冰箱保存不超過14d,再次使用前要強烈地旋渦振蕩不少于5min;隨后的每一步稀釋前被稀釋液也要旋渦振蕩不少于1min;不能使用保存的稀釋液。美國鱟試劑廠家供應的工作標準內毒素(CSE)在使用說明書中都對內毒素的復溶和稀釋有使用旋渦混合器震蕩的要求。同樣,世界衛生組織及各國藥典中的細菌內毒素檢查法也對標準內毒素的稀釋有震蕩混合的要求。

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為什么對標準內毒素的稀釋有如此特殊的要求呢?這與內毒素的化學成分與結構有關。

LPS是具有疏水和親水雙重活性的兩性分子;多糖鏈具有親水性;脂肪鏈具有疏水性。內毒素溶于水或稀釋時,LPS的親水性糖鏈朝向水和水接觸,而疏水性的脂質鏈部分卻背向水,這樣,LPS的疏水端自然聚集成團,形成直徑約為0.1μm的雙層殼狀或泡囊。脂質A藏于聚集團的內部或貼附于器皿上,而脂質A是激活堂試劑的主要部分,在水溶液中,由于其疏水性而不能與鱟試劑充分接觸,造成檢測到的內毒素含量偏低。若是檢測前利用旋渦裝置充分振蕩,可以使貼附于器皿上的內毒素分子脫落,使聚集團的相對分子質量下降。經振蕩后的內毒素溶液重新靜置一段時間后,內毒素仍然會聚集成團或貼附于器皿壁上,所以樣品存放一段時間后,在使用前仍需充分振蕩。

實驗表明,同一批號的國家參考標準內毒素在稀釋時震蕩與否結果相差很大。若采用旋渦震蕩法稀釋內毒素,效價測定的結果與國際參考標準內毒素(IS)基本一致;若不經振蕩稀釋,則測定的效價要比國際參考標準內毒素低50%75%。所以,內毒素在稀釋時一定要充分振蕩,才能得到所標示的效價。在實施1995年版的《中國藥典》前,我國相當部分的鱟試劑在標定靈敏度時,沒采用振蕩稀釋內毒素的方法,導致標定的靈敏度高于實際值100%~300%。也就是說,鱟試劑用戶在使用比標示靈敏度高13倍的堂試劑做細菌內毒素檢查。

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